Přístupnostní navigace
E-přihláška
Vyhledávání Vyhledat Zavřít
Detail předmětu
FEKT-MPC-SSTAk. rok: 2026/2027
Předmět je koncipován jako přehled technik používaných v oblasti mikroskopie a spektroskopie v živých vědách. Předmět tak pokrývá oblasti od světelné mikroskopie včetně pokročilých zobrazovacích technik, dále oblast elektronové mikroskopie a vybrané techniky z oblasti spektroskopických a dalších laboratorních metod nejčastěji používaných v živých vědách. Důraz je kladen na korektní a přiměřené objasnění základních pojmů a technik.
Jazyk výuky
Počet kreditů
Garant předmětu
Zajišťuje ústav
Vstupní znalosti
Student(ka) by měl(a) být schopen/schopna vysvětlit základní optické zákony a znát principy popisu elektromagnetického pole. Měl(a) by mít také dostatečný matematický základ v oblasti maticového počtu.
Pravidla hodnocení a ukončení předmětu
Hodnocení protokolů z laboratoří: max. 50 bodůPrezentace vybrané laboratorní úlohy: max. 10 bodůHodnocení závěrečné zkoušky: max. 40 bodůZávěrečná zkouška je zaměřena na testování znalostí jednotlivých principů v mikroskopii a spektroskopii.Laboratorní praktika jsou povinná a v případě omluvené absence je možná náhrada po domluvě s vyučujícím.
Učební cíle
Cílem předmětu je poskytnout základní orientaci v oblasti světelné mikroskopie a spektroskopie a dalších laboratorních metodách používaných v oblasti živých věd. Absolvent(ka) předmětu je schopen/schopna:- popsat základní vlastnosti elektromagnetického záření a světelných zdrojů,- vysvětlit pojmy jako útlum, absorpce a rozptyl světla,- aplikovat Fresnelovy koeficienty pro konkrétní případy,- popsat princip světelného mikroskopu a funkci jednotlivých komponent,- srovnat vlastnosti polarizační mikroskopie, temného pole, fázového kontrastu a Nomarského kontrastu,- popsat jev fluorescence,- popsat stavbu a aplikace fluorescenčního mikroskopu,- popsat stavbu laserového konfokálního mikroskopu,- vysvětlit princip dvou-fotonové mikroskopie, metody TIRF, FLIM, FRET,- vysvětlit princip superrozlišovacích technik a vybrané techniky popsat,- popsat princip elektronových mikroskopů a vybraných technik,- popsat principy absorpční a emisní elektronové spektroskopie,- popsat principy vibrační spektroskopie (IR, Raman),- diskutovat princip spektrofotometrů a funkci jednotlivých komponent,- charakterizovat a porovnat detektory světelného záření,- vybrat vhodnou mikroskopickou či spektroskopickou techniku pro danou aplikaci.
Základní literatura
Zařazení předmětu ve studijních plánech
specializace MPC-BIO_TECH , 2 ročník, zimní semestr, povinně volitelný
Přednáška
Vyučující / Lektor
Osnova
1. Zdroje a vlastnosti světla. Základní radiometrické veličiny.2. Interakce světla s hmotou (tkání) - absorpce, rozptyl, fluorescence. Chování světla na rozhraní prostředí (lom, odraz, Fresnelovy koeficienty).3. Základní princip světelného mikroskopu, jeho parametry (prostorové rozlišení, numerická apertura, hloubka ostrosti) a limitace dána difrakcí světla.4. Popis a vlastnosti jednotlivých komponent mikroskopu - stativ, kolektor, kondenzor, objektiv, tubusová čočka, okuláry. Příklady mikroskopů jednotlivých výrobců.5. Přímý a invertovaný mikroskop, fluorescenční mikroskop, temné pole, fázový kontrast, Nomarského diferenciální interferenční kontrast, Hoffmanův modulační kontrast.6. Laserová konfokální mikroskopie - princip konfokality, vliv na prostorové rozlišení, techniky pro zrychlení snímání.7. Fluorescenční konfokální mikroskopie, dvoufotonová a vícefotonová mikroskopie.8. Pokročilé mikroskopické techniky - TIRF, FRAP, FRET, holografická mikroskopie, light sheet.9. Superrozlišovací techniky - STED, STORM, PALM.10. Elektronová absorpční a emisní spektroskopie.11. Vibrační spektroskopie - infračervená (FTIR) a Ramanova.12. Elektronová mikroskopie - základní principy TEM, SEM, STEM a další.13. Detekory světla - bodové (PMT, APD, HyD) a maticové (CCD, iCCD, CMOS, sCMOS), parametry a vlastnosti.
Laboratorní cvičení
V rámci jednotlivých laboratorních úloh studentky a studenti postupují podle návodu, vyhodnotí a popíší výsledky měření a na závěr je diskutují s vyučujícím. Dostanou tak zpětnou vazbu a případně se doptají a doplní znalosti z dané problematiky. Témata úloh jsou následující:1. Principy stereomikroskopu - měření rozlišení, ověření vlivu osvětlení, clonového čísla na scénu.2. Princip mikroskopu - konstrukce mikroskopu na optické lavici, vliv kvality osvětlení na rozlišení.3. Konstrukce fluorescenčního mikroskopu - sestavení fluorescenčního mikroskopu, měření rozlišení, vliv objektivů na kvalitu obrazu.4. Difrakce a princip spektrofotometru - využití difrakční mřížky při konstrukci spektrofotometru, vliv štěrbiny na spektrální rozlišení.5. Mikroskopie v tmavém poli a fázový kontrast - studování vlastností temného pole a fázového kontrastu včetně základního zpracování obrazu v softwaru NIS Nikon.6. Měření v polarizovaném světle - ověření principu polarizace, Malusův zákon.7. Vlastnosti fluorescence - práce se spektrofotometry, ověření Kashova pravidla a efektu vnitřního filtru.8. Měření statických vlastností optických detektorů - měření přenosové charakteristiky fotonásobiče a lavinové fotodiody.9. Optické aberace - praktické měření s Hartmann-Shackovým aberometrem, eliminace sférické aberace, studium astigmatismu.10. Maticová reprezentace optických systémů - základní princip a popis jednoduchých systémů.
Seminář
Během semináře studenti a studentky prezentují vybranou laboratorní úlohu, včetně základní teorie, svých výsledků měření a jejich interpretaci. Seminář je koncipován jako mini-konference, tedy i včetně dotazů z publika, tvořeného vyučujícími, studenty a studentkami.
Exkurze
Během semestru je organizována exkurze/workshop k některému výrobci elektronových mikroskopů (Delong Instruments, ThermoFisher Scientific, Tescan). Jedná se obvykle o půldenní aktivitu, na které jsou shrnuty principy elektronové mikroskopie a dále je možné prakticky si vyzkoušet měření, či se podívat do výrobních prostor.
Individuální příprava na laboratoře
Studenti a studentky mají k dispozici ke každé laboratorní úloze zpracované materiály ke studiu. Ty si samostatně prostudují předem a případně si dohledávají informace v prezentacích k přednáškám či čerpají z jiných zdrojů, které jsou uvedeny na e-learningu k předmětu. Určitý čas také věnují přípravě na seminář, kde prezentují předem určené téma.
Individuální příprava na závěrečnou zkoušku