Detail předmětu

Mikroskopické a spektroskopické techniky v živých vědách

FEKT-MPC-SSTAk. rok: 2026/2027

Předmět je koncipován jako přehled technik používaných v oblasti mikroskopie a spektroskopie v živých vědách. Předmět tak pokrývá oblasti od světelné mikroskopie včetně pokročilých zobrazovacích technik, dále oblast elektronové mikroskopie a vybrané techniky z oblasti spektroskopických a dalších laboratorních metod nejčastěji používaných v živých vědách. Důraz je kladen na korektní a přiměřené objasnění základních pojmů a technik.

Jazyk výuky

čeština

Počet kreditů

5

Vstupní znalosti

Student(ka) by měl(a) být schopen/schopna vysvětlit základní optické zákony a znát principy popisu elektromagnetického pole. Měl(a) by mít také dostatečný matematický základ v oblasti maticového počtu. 

Pravidla hodnocení a ukončení předmětu

Hodnocení protokolů z laboratoří: max. 50 bodů
Prezentace vybrané laboratorní úlohy: max. 10 bodů
Hodnocení závěrečné zkoušky: max. 40 bodů
Závěrečná zkouška je zaměřena na testování znalostí jednotlivých principů v mikroskopii a spektroskopii.
Laboratorní praktika jsou povinná a v případě omluvené absence je možná náhrada po domluvě s vyučujícím. 

 

Učební cíle

Cílem předmětu je poskytnout základní orientaci v oblasti světelné mikroskopie a spektroskopie a dalších laboratorních metodách používaných v oblasti živých věd. Absolvent(ka) předmětu je schopen/schopna:
- popsat základní vlastnosti elektromagnetického záření a světelných zdrojů,
- vysvětlit pojmy jako útlum, absorpce a rozptyl světla,
- aplikovat Fresnelovy koeficienty pro konkrétní případy,
- popsat princip světelného mikroskopu a funkci jednotlivých komponent,
- srovnat vlastnosti polarizační mikroskopie, temného pole, fázového kontrastu a Nomarského kontrastu,
- popsat jev fluorescence,
- popsat stavbu a aplikace fluorescenčního mikroskopu,
- popsat stavbu laserového konfokálního mikroskopu,
- vysvětlit princip dvou-fotonové mikroskopie, metody TIRF, FLIM, FRET,
- vysvětlit princip superrozlišovacích technik a vybrané techniky popsat,
- popsat princip elektronových mikroskopů a vybraných technik,
- popsat principy absorpční a emisní elektronové spektroskopie,
- popsat principy vibrační spektroskopie (IR, Raman),
- diskutovat princip spektrofotometrů a funkci jednotlivých komponent,
- charakterizovat a porovnat detektory světelného záření,
- vybrat vhodnou mikroskopickou či spektroskopickou techniku pro danou aplikaci.

 

Základní literatura

Keiser, G. Biophotonic: Concepts and Applications. Springer, 2022. ISBN 978-981-19-3481-0. (CS)
Kuběna, J. Úvod do optiky. Nakladatelství Masarykovy univerzity, 1994. ISBN 80-210-0835-0 (CS)
Prasad, P.N.. Introduction to Biophotonics. John Wiley & Sons, 2003. ISBN 9780471287704. (EN)

Zařazení předmětu ve studijních plánech

  • Program MPCN-BIO magisterský navazující

    specializace MPC-BIO_TECH , 2 ročník, zimní semestr, povinně volitelný

  • Program MPCN-BTB magisterský navazující 2 ročník, zimní semestr, povinně volitelný

Typ (způsob) výuky

 

Přednáška

26 hod., nepovinná

Vyučující / Lektor

Osnova

1. Zdroje a vlastnosti světla. Základní radiometrické veličiny.
2. Interakce světla s hmotou (tkání) - absorpce, rozptyl, fluorescence. Chování světla na rozhraní prostředí (lom, odraz, Fresnelovy koeficienty).
3. Základní princip světelného mikroskopu, jeho parametry (prostorové rozlišení, numerická apertura, hloubka ostrosti) a limitace dána difrakcí světla.
4. Popis a vlastnosti jednotlivých komponent mikroskopu - stativ, kolektor, kondenzor, objektiv, tubusová čočka, okuláry. Příklady mikroskopů jednotlivých výrobců.
5. Přímý a invertovaný mikroskop, fluorescenční mikroskop, temné pole, fázový kontrast, Nomarského diferenciální interferenční kontrast, Hoffmanův modulační kontrast.
6. Laserová konfokální mikroskopie - princip konfokality, vliv na prostorové rozlišení, techniky pro zrychlení snímání.
7. Fluorescenční konfokální mikroskopie, dvoufotonová a vícefotonová mikroskopie.
8. Pokročilé mikroskopické techniky - TIRF, FRAP, FRET, holografická mikroskopie, light sheet.
9. Superrozlišovací techniky - STED, STORM, PALM.
10. Elektronová absorpční a emisní spektroskopie.
11. Vibrační spektroskopie - infračervená (FTIR) a Ramanova.
12. Elektronová mikroskopie  - základní principy TEM, SEM, STEM a další.
13. Detekory světla - bodové (PMT, APD, HyD) a maticové (CCD, iCCD, CMOS, sCMOS), parametry a vlastnosti. 

Laboratorní cvičení

30 hod., povinná

Vyučující / Lektor

Osnova

V rámci jednotlivých laboratorních úloh studentky a studenti postupují podle návodu, vyhodnotí a popíší výsledky měření a na závěr je diskutují s vyučujícím. Dostanou tak zpětnou vazbu a případně se doptají a doplní znalosti z dané problematiky. Témata úloh jsou následující:
1. Principy stereomikroskopu - měření rozlišení, ověření vlivu osvětlení, clonového čísla na scénu.
2. Princip mikroskopu - konstrukce mikroskopu na optické lavici, vliv kvality osvětlení na rozlišení.
3. Konstrukce fluorescenčního mikroskopu - sestavení fluorescenčního mikroskopu, měření rozlišení, vliv objektivů na kvalitu obrazu.
4. Difrakce a princip spektrofotometru - využití difrakční mřížky při konstrukci spektrofotometru, vliv štěrbiny na spektrální rozlišení.
5. Mikroskopie v tmavém poli a fázový kontrast - studování vlastností temného pole a fázového kontrastu včetně základního zpracování obrazu v softwaru NIS Nikon.
6. Měření v polarizovaném světle - ověření principu polarizace, Malusův zákon.
7. Vlastnosti fluorescence - práce se spektrofotometry, ověření Kashova pravidla a efektu vnitřního filtru.
8. Měření statických vlastností optických detektorů - měření přenosové charakteristiky fotonásobiče a lavinové fotodiody.
9. Optické aberace - praktické měření s Hartmann-Shackovým aberometrem, eliminace sférické aberace, studium astigmatismu.
10. Maticová reprezentace optických systémů - základní princip a popis jednoduchých systémů.

 

Seminář

3 hod., nepovinná

Vyučující / Lektor

Osnova

Během semináře studenti a studentky prezentují vybranou laboratorní úlohu, včetně základní teorie, svých výsledků měření a jejich interpretaci. Seminář je koncipován jako mini-konference, tedy i včetně dotazů z publika, tvořeného vyučujícími, studenty a studentkami.

 

Exkurze

3 hod., nepovinná

Vyučující / Lektor

Osnova

Během semestru je organizována exkurze/workshop k některému výrobci elektronových mikroskopů  (Delong Instruments, ThermoFisher Scientific, Tescan). Jedná se obvykle o půldenní aktivitu, na které jsou shrnuty principy elektronové mikroskopie a dále je možné prakticky si vyzkoušet měření, či se podívat do výrobních prostor.

 

Individuální příprava na laboratoře

20 hod., nepovinná

Vyučující / Lektor

Osnova

Studenti a studentky mají k dispozici ke každé laboratorní úloze  zpracované materiály ke studiu. Ty si samostatně prostudují předem a případně si dohledávají informace v prezentacích k přednáškám či čerpají z jiných zdrojů, které jsou uvedeny na e-learningu k předmětu. Určitý čas také věnují přípravě na seminář, kde prezentují předem určené téma.

 

Individuální příprava na závěrečnou zkoušku

38 hod., nepovinná

Vyučující / Lektor