Tato diplomová práce se zabývá studiem interakcí hyaluronanu s proteinem TSG-6 a dalšími složkami krevního séra v závislosti na fyzikálně-chemických parametrech prostředí. Byla vypracovaná kvalitní literární rešerše na téma hyaluronan, interakce s hyaladheriny, význam proteinu TSG-6, inter-alfa-inhibitoru a těžkých řetězců biologických procesech. V experimentální části byly připravené vzorky roztoků a optimalizována metodika studia interakcí pomocí křemenných mikrovah s impedančním měřením, které byly vybrány jako optimální metoda pro zadaný cíl. Byla provedena příprava a modifikace senzorů pro imobilizaci biotinylovaného hyaluronanu a následné sledování vazby proteinu TSG-6, proteinů plného séra a purifikovaného inter-alfa-inhibitoru. Byla charakterizována tvorba hyaluronanové vrstvy na senzoru a diskutován vliv podmínek prostředí. Studentka systematicky studovala vliv molekulové hmotnosti hyaluronanu, teploty, pH a přítomnosti hořečnatých iontů na interakce hyaluronanu s TSG-6 a sérovými proteiny. Důležitou součástí práce bylo porovnání chování plného séra a purifikovaného inter-alfa-inhibitoru. Byla popsána výrazná závislost vaznosti na molekulové hmotnosti hyaluronanu, přičemž krátké oligosacharidy HA se ukázaly jako velmi efektivní systém pro vazbu TSG-6. Naměřené výsledky byly vhodně interpretovány s ohledem na strukturu a vlastnosti hyaluronanu, povahu použitých proteinů a podmínky prostředí. Studentka dokázala výsledky korelovat s poznatky z literatury a diskutovat jejich význam ve vztahu k tvorbě komplexů hyaluronanu s TSG-6, inter-alfa-inhibitorem a těžkými řetězci. Práce přináší cenné poznatky pro další výzkum interakcí hyaluronanu v komplexních biologických prostředích. Práce je kvalitní, přehledně členěná a závěry jsou dobře formulovány. Při řešení diplomové práce studentka prokázala samostatnost, pečlivý přístup k experimentální práci a schopnost řešit výzvy spojené se studiem komplexních biomolekulárních systémů. Osvojila si náročnou bioanalytickou metodu, dokázala koordinovat rozsáhlejší sérii měření a výsledky zasadit do širšího kontextu. Diplomovou práci hodnotím jako výbornou.

Práce pojednává o interakcích mezi hyaluronanem, proteinem TSG-6 a dalšími sérovými proteiny. Literární rešerše je přiměřeně obsáhlá, přehledná a dobře zpracovaná. Citace zdrojů jsou věcné a přiměřeně aktuální. Celkový počet zdrojů je nadprůměrný. Doporučil bych pouze upustit od příliš jemného dělení, kdy podkapitoly čtvrté úrovně často obsahují pouze jeden nebo dva odstavce textu. Výsledková část je co do obsáhlosti spíše průměrná až lehce podprůměrná, což lze ovšem ospravedlnit s přihlédnutím k vysoké pracnosti a časové náročnosti zvolené metodiky, která přímo vychází ze zadaného tématu práce. Výsledky jsou prezentovány celkem přehledně, jejich diskuze je přiměřeně obsáhlá. Práce je však bohužel poněkud nedůsledná. Kromě četných překlepů a gramatických chyb tak např. Obrázek 10 zobrazuje poměr |dFWHM5/df5| jako indikátor tuhosti vrstvy hyaluronanu při pH 6 a teplotě 37 °C, avšak obdobná data pro pH 7,4 v práci nejsou uvedena graficky ani číselně, navzdory tomu, že jsou diskutována v textu. Zapracovat by šlo také na grafické prezentaci některých obrázků, např. Obrázek 12 a Obrázek 13 působí poněkud prázdně, když každý zobrazuje pouze 4 body. Práce také nevyužívá veškerý dostupný potenciál výsledků, kdy se nepokouší převést surové výsledky do obecnějšího rámce, konkrétně převést změnu frekvence na nárůst hmotnosti pomocí rovnice 1 a korelovat ji s daty v literatuře. I přes dílčí nedostatky práce vyhovuje požadavkům a doporučuji ji k obhajobě. Topics for thesis defence:

1. Rozveďte prosím prohlášení, že „byla potvrzena chemisorpce biotin PEG-10 thiolu na zlatý povrch (tvorba kovalentní vazby Au-S)” (Str. 45). Biotin PEG-10 thiol byl aplikován ve směsi s PEG-7 thiolem v poměru 1:99, jak jste poznala, že došlo k chemisorpci právě první a méně koncentrované z těchto dvou zmíněných látek?
2. Pokuste se určit přírůstek hmotnosti adsorbované vrstvy hyaluronanu a odhadnout její přibližnou tloušťku.