Diplomová práce Bc. Patricie Chýlkové se zaměřuje na vývoj a pokročilou fyzikálně-chemickou charakterizaci liposomálních systémů s terapeutickým proteinem FGF10-STAB® pro plicní aplikaci. Text je psán čtivou formou, jednotlivé kapitoly na sebe plynule navazují a po formální i typografické stránce je práce zpracována na vysoké úrovni. Kladně hodnotím rozsáhlou a pečlivě zpracovanou literární rešerši, ze které je zřejmé, že studentka výborně pracovala se zdroji, plně porozuměla řešené problematice a dokázala nabyté poznatky efektivně aplikovat ve vlastním výzkumu. V experimentální části studentka srovnávala dva různé přístupy k přípravě liposomů (metodu hydratace lipidního filmu a Mozafariho metodu) a zároveň hodnotila vliv různých lipidních kompozic. K hodnocení připravených formulací využila spektrum pokročilých analytických metod, které doplnila o in vitro sledování buněčného uptake a hodnocení cytotoxicity. Komplexnost práce dále podtrhuje posouzení vybraných formulací z hlediska jejich stability a vhodnosti pro inhalační podání formou nebulizace. Získané výsledky a formulované závěry představují cenný přínos pro další řešení projektu „Regenerativní strategie podporující zlepšení a obnovu plicních funkcí“. Práce prokazuje vysokou míru samostatnosti studentky i její praktickou a teoretickou připravenost. Vzhledem ke kvalitě zpracování, komplexnosti experimentálního designu a celkovému přínosu navrhuji hodnocení stupněm „výborně“ (A). Points proposed by supervisor: 100

Předložená diplomová práce Bc. Patricie Chýlkové se zaměřuje na vývoj a pokročilou fyzikálně-chemickou charakterizaci lipozomálních systémů pro uvolňování biomolekul v plicním modelu, konkrétně FGF10-STAB® pro léčbu syndromu akutní dechové tísně (ARDS). Práce je psána v anglickém jazyce, čítá celkem 73 stran, z čehož 9 stran tvoří přílohy doplňující výsledky uvedené v hlavní části práce. Text je psán odborným jazykem a úroveň angličtiny je velmi vysoká. V některých částech práce se objevují delší souvětí, která by mohla být pro lepší čitelnost rozdělena, případně se opakují některá slovní spojení (on the other hand). V textu se vyskytují pouze minimální typografické chyby, což svědčí o pečlivé korektuře. Výsledky experimentů jsou komentovány velmi podrobně a jsou podloženy relevantními vědeckými publikacemi.
Studentka se zaměřuje na přípravu lipozomů Mozafariho metodou a metodou hydratace tenkého filmu (TFH). Obě metody byly použity k přípravě lipozomů s různým složením. Lipozomy byly charakterizovány pomocí metody dynamického rozptylu světu, přičemž byla sledována jejich velikost, index polydisperzity a zeta potenciál, a to po přípravě, po stanovené době až do 14. dne a po nebulizačním experimentu. Dále byly provedeny experimenty buněčného příjmu a cytotoxicity na myší fibroblastové buněčné linii L929. Enkapsulační účinnost (EE) byla stanovena pomocí metody ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay).
Hlavním cílem práce bylo připravit lipozomy s požadovanými vlastnostmi, tedy velikostí lipozomů pod 200 nm, enkapsulační účinností 50–60 %, nízkou cytotoxicitou a dostatečnou stabilitou během nebulizace. Vybrané lipozomální formulace byly následně testovány také na buněčné linii A549 (lidské alveolární bazální epiteliální buňky). Lipozomální formulace připravené metodou hydratace tenkého filmu (TFH) se jeví jako vhodní kandidáti pro pulmonární podávání FGF10-STAB®, a to díky nízké cytotoxicitě, vysokému buněčnému příjmu, vysoké enkapsulační účinnosti a dostatečné stabilitě. Topics for thesis defence:

1. Why was the encapsulation efficiency (EE) determined using an indirect method, i.e., by measuring the non-encapsulated FGF10-STAB® using the ELISA method? How could EE be determined using a direct method?
2. The high cytotoxicity of the Mozafari liposomes (40–50 % viability) was most likely caused by the high concentration of liposomes (10 mg/mL) used in the experiment. Why was this particular concentration selected, and how would you modify the experimental design to verify the effect of liposomes concentration on cytotoxicity in order to assess the suitability of Mozafari liposomes for pulmonary delivery more reliably?
3. For the Mozafari liposomes, you observed inconsistent and fluctuating zeta potential values (p. 47, Figure 31), particularly in the presence of FGF10-STAB®, and you suggested that physiological saline might not be a suitable dispersing medium. What alternative approaches or solvents would you recommend for obtaining more reliable zeta potential measurements of these formulations?